Войти

Руководство по жидкостной биопсии при немелкоклеточном раке легких (International Association for the Study of Lung Cancer, июнь 2018)

Обзор мировой медицинской периодики 2018

Обзор



В журнале Journal of Thoracic Oncology 06 июня 2018 г. опубликовано руководство International Association for the Study of Lung Cancer по жидкостной биопсии при немелкоклеточном раке легких.

Рекомендации:

- Плазма является предпочтительной, чем сыворотка, для извлечения бесклеточной опухолевой ДНК.

- Предлагаемое максимальное время с момента забора крови и до отделения плазмы составляет 2 часа для пробирок EDTA, и 3 дня для пробирок с консервантом. Лаборантам, проводящим забор и транспортировку с последующей пересылкой крови должны помнить о данных ограничениях во времени.

- Очень рекомендуется процедура двойного центрифугирования для отделения плазмы.

- Вне зависимости от типа пробирок, ни в коем случае их нельзя замораживать до отделения плазмы.

- Пробирки EDTA и пробирки для консервации, и то и другое подходят для извлечения бесклеточной опухолевой ДНК. Пробирки EDTA требуют обработки на месте и повышают риск деградации бесклеточной опухолевой ДНК и геномное ДНК загрязнение, если неправльно с ними обращаться. По сравнению с ними, пробирки с консервантом дают больше гибкости по времени до обработки и снижают риск деградации и загрязнения.

- Рекомендуется забор 2х пробирок для адекватного анализа. Большинство лабораторий требуют 2 стандарные пробирки по 10 мл.

- Выделение ДНК должно производиться с использованием протокола или набора для маленького фрагментированного ДНК.

- Допустимо применение валидированных методов качественной полимеразной цепной реакции (qPCR) с таргетированием на специфические мутации, такие как мутации EGFR. Данный метод имеет ограниченные способности, такие как только поиск дискретных заранее обозначенных мутаций в ограниченном количестве онкогенов, и таким образом пропуская редкие, но не менее клинически значимые мутации.

- Секвенирование следующего поколения (NGS) с мультиплексной панелью фокусируется на клинически значимых генах, которые: 1) задействуют валидированные защищенные от ошибок технологии с достаточной чувствительностью и специфичностью для применения для бесклеточной опухолевой ДНК ; 2) Комплексно оценивают варианты с одним основанием, инсерции (indels) , количество вариаций копий и отдают предпочтения хромосомным перестроениям. Однако NGS мультиплексные панели более дорогие на настоящий момент и не настолько широко распространены.

- Ожидаемое время получения результата анализа биопсии ткани составляет более 2х недель и может считаться резонным, и необходимо рассмотреть жидкостную биопсию вне зависимости от анализа биопсии ткани.

- Критерии для отбора ранее не леченых пациентов на молекулярное тестирование бесклеточной опухолевой ДНК являются такими же как и для молекулярно тестирования тканевой ДНК : 1) все пациенты с поздими стадиями / метастатическим не-плоскоклеточным немелкоклеточном раке легких, 2) пациенты с плоскоклеточным немелкоклеточным раком легких с клиническими признаками (например никогда не куривший и/или более молодой возраст), предполагающими наличие молекулярного драйвера, 3) имеется не-плоскоклеточный компонент в результатах гистологии. Проведение клинических исследований с молекулярным отбором также является показанием, но врач должен подтвердить, что тестирование на основе плазмы подходит для целей исследования.

- Можно рассмотреть жидкостную биопсию у всех пациентов при изначальной диагностике, которым требуется определение молекулярного профиля опухоли, но особенно рекомендуется если имеется малое количество опухолевой ткани, её нет или имеется значительная задержка в получении ткани более 2х недель. Данная ситуация наиболее подходит при малом количестве ткани, у пациентов, которым рискованна или противопоказана инвазивная процедура, или при необходимости в биопсии кости, учитывая что хотя биопсия кости является достаточной для гистологической диагностики, но может быть не пригодна для молекулярного тестирования, так как декальцифицирующие растворы могут повредить опухолевую ДНК.

- Положительный результат на мутацию бесклеточной опухолевой ДНК при применении валидированного метода тестирования является достаточным для начала таргетированной терапии. Но отрицательный результат должен считаться неопределенным и дальше необходимо вторичное тестирование.

- Метод cobas EGFR Mutation Test v2 является приемлемым тестом бесклеточной опухолевой ДНК  для обнаружения EGFR  сенситизирующей мутации и положительный результат теста является достаточным для начала лечения первой линии с EGFR -ингибиторами тирозин-киназы. Однако, отрицательный результат должен быть в последующем проверен либо исследованием ДНК из биопсии ткани опухоли, либо тестированием с применением более чувствительных тестов (например ddPCR или NGS) .

- Необходимо рассмотреть тест ddPCR для обнаружения сенситизирующих EGFR  мутаций и получение положительного результата является достаточным для начала терапии, нацеленной на данные нарушения. Однако, отрицательный результат требует последующей проверки либо тестом на основании NGS, либо тестом ДНК из биопсии ткани опухоли.

- Не рекомендуется рутинное применение методов на основе ПЦР для обнаружения в ДНК реорганизаций ALK или ROS1.

- Мультиплексная панель на основе NGS является надежным методом и является предпочтительным , так как данные методы могут обнаруживать за пределами обычных мутаций и могут применяться для оценки  инсерции (indels), изменений количества копий и транслокаций. Положительный результат на EGFR, ALK, ROS1 или BRAF должен считаться достаточным для начала терапии первой линии. Обнаружение онкогенного мутационного драйвера отличного от EGFR, ALK, ROS1 или BRAF может быть достаточным для включения пациента в клиническое исследование в зависимости от критериев исследования. Отрицательный результат NGS  на нарушения онкогенного драйвера не является достаточным для исключения терапии и требует подтверждения из биопсии ткани опухоли.

- Тестирование на изменения EGFR с примением метода с достаточной чувствительностью рекомендуется для пациентов с прогрессированием, либо клинически или радиологически, во время лечения с EGFR -ингибиторами тирозин-киназы первого или второго поколения. Отрицательный результат, такой как отсутствие T790M должен считаться неопределенным и должен далее проверяться с применением более чувствительного и/или развернутого теста с использванием бесклеточной опухолевой ДНК, либо ДНК из биопсии ткани опухоли.

- Мультиплексная панель NGS является предпочтительной чем методы ПЦР, так как она обнаруживает не только обычный механизм сопротивления T790M , но и способен обнаружить спектр различных нарушений. Положительный результат EGFR T790M должен быть достаточен для начала применения осимертиниба как препарата второй линии после прогрессирования на терапии EGFR -ингибиторами тирозин-киназы первого или второго поколения. Однако, отрицательный результат требует подтверждения молекулярным анализом ткани биопсии опухоли. Если результат теста ткани биопсии также отрицателен на T790M , то результаты панели NGS возможно обнаружат другие механизмы сопротивления , которые и направят лечение через клинические исследования, или через расширенный доступ. Необходимо отметить, отрицательный результат T790M  будет иметь большую надежность , если результат одновременного теста на первичную мутацию EGFR  будет положителен. Однако, так как T790M  очень часто находится на более низком MAF (формат аннотации мутаций) по сравнению с первичными мутациями, он может быть пропущен при исследовании плазмы и поэтому требует последующей проверки. При ситуациях когда оба отрицательны, то тогда более вероятно что опухоль не выделяет адекватное количество ДНК для обнаружения.

- Обраружение ALK приобретенных резистентных мутаций у пациентов с прогрессированием во время получения ALK-ингибиторов тирозин-киназы не требуется в клинической практике для смены на другой ALK-ингибитор тирозин-киназы. Однако, данная информация может быть полезна для оптимального подбора ингибитора тирозин-киназы следующего поколения, которые имеют другую активность на определенные мутации. Когда нет возможности повторной биопсии из места прогрессирования опухоли, то комплексное тестирование с применением панели NGS с бесклеточной опухолевой ДНК является более предпочтительным, так как эта методика может дать информацию не только по ALK резистентным мутациям, но также по другим молекулярным механизмам резистентности, по которым пациент может получить лечение либо через клинические исследования, либо по расширенному доступу.

- Результат жидкостной биопсии должен содержать в себе использованную методику (платформу) и все находки молекулярного анализа.

- Результат должен указывать являются ли обнаруженные нарушения клинически значимыми согласно имеющимся доказательствам.

-
Утвержденная классификационная система может дать руководство по написанию заключений с указанием клинической значимости генетических нарушений.

- Должна быть указана вариантная частота аллели (variant allele frequency, VAF) обнаруженной мутации, которая будет информативной при долгосрочном анализе.

Подробнее смотрите в прикрепленном файле.

Посмотреть другие обзоры

Автор обзора


Автор обзоров мировой медицинской периодики на портале MedElement - врач общей практики, хирург Талант Иманалиевич Кадыров.
Закончил Киргизский Государственный медицинский институт (красный диплом), в совершенстве владеет английским языком. Имеет опыт работы хирургом в Чуйской областной больнице; в настоящий момент ведет частную практику.
Регулярное повышение квалификации: курсы Advanced Cardiac Life Support, International Trauma Life Support, Family Practice Review and Update Course (Англия, США, Канада).

Прикреплённые файлы

Внимание!

  • Занимаясь самолечением, вы можете нанести непоправимый вред своему здоровью.  
  • Информация, размещенная на сайте MedElement, не может и не должна заменять очную консультацию врача. Обязательно обращайтесь в медицинские учреждения при наличии каких-либо заболеваний или беспокоящих вас симптомов.  
  • Выбор лекарственных средств и их дозировки, должен быть оговорен со специалистом. Только врач может назначить нужное лекарство и его дозировку с учетом заболевания и состояния организма больного.  
  • Сайт MedElement является исключительно информационно-справочным ресурсом. Информация, размещенная на данном сайте, не должна использоваться для самовольного изменения предписаний врача.  
  • Редакция MedElement не несет ответственности за какой-либо ущерб здоровью или материальный ущерб, возникший в результате использования данного сайта.
На главную
Наверх